لدغات الحشرات

 

صبغة جرام Gram Staining

تم تطوير تفاعل صبغة جرام بالغ الأهمية في عام 1884 من قبل الطبيب الدنماركي كريستيان جرام  ولقد  اخترع طريقة الصبغة هذه للتفريق بين نوعين جوهرين من البكتيريا واحدة منهم موجبة الصبغة والأخرى سالبة حيث تصبغ تلك التي تكون إيجابية الجرام (بنفسجي) وتلك التي تحتوي على سلبية الجرام (أحمر).

•   لاحظ العالم  من خلال  دراسته لتركيب البكتيريا انها كائنات اولية وبدائية  وأن جميعها تقريبا محاطة بجدار خلوي cell wall وهو غسر موجود في الخلايا الحيوانية وهذا الجدار يعتبره هدف مهم لمضادات حيوية قاتلة للبكتيريا  بحيث ان المضاد يكون selective اي اختیاری او انتقائي يعمل بصورة كبيرة على خلايا البكتيريا بينما يسبب اقل الضرر للخلايا البشرية لانها لا تحتوي على جدار خلوى يمكن للمضاد مهاجمته.

• النوع الاول :
  جرام بوستيف (Gram positive ( Gm + ve

 حيث لاحظ العالم جرام أنه بعض أنواع  البكتيريا تحتوى على جدار خلوي سميك جدا وتحت الجدار الخلوي يوجد الغشاء السيتوبلازمي  cell membrane وأطلق عليها اسم بكتيريا موجبة الجرام 

• النوع الثاني :
  جرام نيجتف (Gram negative ( Gm - ve

وهذا النوع من البكتيريا يحتوي أيضا على جدار خلوي ولكنه رفيع واقل سمكا من البكتيريا الموجبة جرام  وتحته يوجد cell membrane  ولكنه يوجد فوقه غلاف خارجي يسمى outer envelope وهو يتكون  بصفة رئيسية دهون وسكريات واسمه lipopolysaccharide واختصاره LPS ويسمى هذا النوع بكتيريا سالبة جرام .

 ويعتبر علاج الأمراض التي تسببها  البكتيريا السالبة أصعب من البكتيريا الموجبة ولذلك  لانها محمية ب 3 طبقات والغلاف الاخير المكون من LPS يشكل عازل واقي يمنع اختراق أغلب المضادات الحيوية ولكن يوجد في الجدار الخارجي قنوات صغيرة اسمها porins تشبه الثقوب الرفيعة الضيقة وهي التي تسمح للمضادات بأن تمر من خلالها وتخترق الخلية البكتيرية وبكن يجب ان يكون مضادا متخصص في مثل هذا النوع من البكتيريا  .

 الجدار الخلوي موجود في كل انواع البكتيريا سواء سالبة او موجبة و يحتوي على مادة اساسية اسمها peptidoglycan وواضح من اسمها انها عبارة عن بروتين  peptide وهي  رابطة تربط الأحماض الأمينية ببعضها وتحتوى على سكريات  glycan مشتقة  من كلمة جلوكوز وهذه المواد مرتبطة ببعضها بروابط قوية اسمها trans peptide .

 خطوات الصباغة :

  1- مسحة محضرة من البكتيريا المقدمة. 

 2 - قم بتغطية المسحة بمادة crystal violet لمدة 30 ثانية وهذه ابصبغة تصبغ كل البكتيريا التي على الشريحة الموجبة والسالبة ولا  تفرق بينهم  وبالتالي البكتيريا كلها تظهر تحت الميكروسكوب باللون الازرق او البنفسجي .

 3 - اغسل البقعة بماء الصنبور (بالتنقيط).

  4 - غطي البقعة بمحلول اليود iodine  لمدة دقيقة ثم اسكبها عند إضافة اليود يتحد مع الصبغة ويكون مركب stable اسمه crystal violet - iodine complex وحتى هذه اللحظة تكون جميع البكتيريا مصبوغة بنفس اللون .

 

5- يغسل بالكحول الإيثيلي (95٪) بالتنقيط لمدة (10-20) ثانية عند غسل الشريحة بمحلول الكحول الايثيلى الطبي وجد  انه بعض البكتيريا ما زالت محتفظة باللون البنفسجي و هي البكتيريا الموجبة  وذلك لان جدارها الخلوي سميك جدا وبالتالي نجح في تكوين كمية كبيرة من stable complex ونجح في الاحتفاظ بالصبغة بسبب سمكه الكبير أما البكتيريا الباقية فقدت لونها واصبحت عديمة اللون لان الكحول وهو مذيب قوى للدهون نجح في اذابة LPS وهو الغلاف الخارجي ودخل ال cell wall ا هو طبقة رفيعة  وبالتالي نجح في اذابة لون ال complex وأصبحت البكتيريا عديمة اللون 

  6 - ثم يغسل بالماء مرة اهرى .

 7 - يتم إضافة صبغة  السفرانينSafranin أو الكاربول فوشن carbol fuchsin لمدة 30 ثانية وهذه الصبغة تصبغ البكتيريا عديمة اللون بالون الاحمر 

  8 - يغسل بالماء ثم يجف. 

 

9- إذا ظهرت البكتيريا تحت الميكروسكوب باللون الازرق فهي موجبة مثل:

•  staphylococci 

• Pneumococci

• Diphtheria

• Diphtheroids

10- إذا ظهرت البكتيريا تحت الميكروسكوب باللون الاحمر فهي سالبة مثل:

• Neisseria cocci

• E.coli

• Klebsiella

• Vibrio cholera

• البكتيريا المعوية Enterobacteriaceae مثل :

• السالمونيلا والشيجلا salmonella , shagila

الكاتبة : روزالين كاتبة 

المصدر :https://www.mayocliniclabs.com/api/sitecore/TestCatalog/DownloadTestCatalog?testId=8078